抗体由于性质和所使用的储存条件不同,其存储的“保质期”可能从几周到几年不等。尽管每个抗体存储的最佳条件是独特的,但EBET易博还是能够总结出一些关于抗体存储建议和一般准则。
抗体的储存时间取决于抗体固有的性质和储存条件。抗体(尤其是酶)必须存放在适当的温度和pH值范围。为了维持蛋白质的活性、防止其聚集,经常保存在一定浓度的甘油,蔗糖,或类似的物质里面。
1、低温储存对于抗体的保存至关重要
一般来说,抗体最好存放在≤4℃的清洁,灭菌的玻璃或塑料管。贮存在室温下通常会由于微生物的生长导致抗体退化和/或失活。抗体储存液放在4℃环境中1天或者几周内其活性不会受到明显影响。另外,抗体中可以加入终浓度为50%的甘油或乙二醇储存于-20℃。通常EBET易博为了避免反复冻融,可以分装抗体。我还可以加入抗微生物药物(如叠氮化钠或硫柳汞)以避免微生物的生长。
带有标记的抗体最好存放在终浓度为50%的甘油或乙二醇里并防止在-20℃的环境中。尽管有些酶结合物可以不加抗冻剂储存在-20℃,但是这些抗体必须分装使用以防止反复冻融,尤其是碱性磷酸酶偶联对冻融特别敏感。带有标记的抗体通常可以在甘油或乙二醇中于-20℃保存1-2年。但是,在冷冻保护剂的污染物可能会影响酶的活性。
一些研究人员发现多克隆抗体在血清中于-20℃保存十年其活性损失不大。然而,一旦抗体被纯化后,储存在50%的甘油中于-20℃保存,即使没有冻融,其活性的损失也可以观察到,尽管其进程仍然非常缓慢。但许多研究者需要将这些多克隆抗体注射到动物体内,为了避免内毒素的干扰,一般都不加入甘油。而且大量研究表明:即使没有甘油,只要你不反复冻融,抗体也可以存储在-20℃几年甚至几十年。另一个重要的事情是,该抗体浓度应高于1毫克/毫升,因为稀的抗体容易失去活性而且容易造成物理吸附导致的损失。而单克隆抗体可以用两种方式保存:第一,保存在50%的甘油存放于-20℃;第二,也是比较好的方式,将其保存在饱和硫酸铵于4℃或-20℃(4℃更好)保存。多年未见有失活、细菌滋生以及氧化。有些研究人员为了长期储存抗体,将抗体分装后放置于液氮中。然而抗体存储在-20℃或-80℃更常见,因为冻融降低蛋白质的稳定性,所以EBET易博一定要分装抗体使用,这样就可以避免抗体的反复冻融。而冻干法(冷冻干燥,干燥或从冰冻状态)为一些冰冻以后不稳定抗体提供了一种替代的保存方法。在大多数情况下,冻干的抗体最好是存放在-20℃。虽然冷冻干燥有许多优点,它需要昂贵的设备和劳动力。
2、向抗体储存液中加入抗氧化剂是防止抗体因氧化失效的关键步骤
氧化反应是某些酶,尤其是巯基酶的共同问题。为了防止氧化反应对抗体的破坏,EBET易博可以向抗体中加入一些还原剂(如二硫苏糖醇(DTT)或2 - 巯基乙醇(2-ME))。实验证明:越高的pH环境和温度,这些有酶活性的抗体的保存时间越短。此外,加入0.1mM的铜离子其氧化率增加,而加入金属螯合剂EDTA增加其保存的有效期。
3、蛋白质稳定剂和抗生素对于抗体的稳定储存也发挥着重要作用
蛋白质稳定试剂可以延长大多数蛋白质在4℃或-20℃的保质期。而25-50%的甘油或乙二醇等防冻剂有助于稳定抗体,防止在-20℃环境中形成冰晶,避免其破坏蛋白质的结构。蛋白酶抑制剂的加入可以防止抗体发生水解反应导致其失活。而抗微生物药物,如最终浓度在0.02-0.05%(W / V)的叠氮化钠(NaN3的)或终浓度为0.01%(W / V)的硫柳汞可以抑制微生物的生长。
4、抗体的储存浓度对于抗体保存的有效期也有显著影响
抗体浓度过低(<1毫克/毫升)更容易发生抗体的失活以及增加物理吸附造成的损失。因此,EBET易博都要尽量的保持抗体(例如,大于1毫克/毫升)在储存期间的浓度。通常的做法是添加“载体”蛋白质,如纯化牛血清白蛋白(BSA)以防止这种降解和损失。