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冷冻细胞活化步骤
1.冷冻细胞的活化原则为快速解冻   ,避免冰晶重新结晶对细胞造成伤害,导致细胞死亡  。

2.细胞活化后 ,约需数日   ,或继代一至二代,其细胞生长或特性表现才会恢复正常(例如产
生单株抗体或是其它蛋白质)。2y2Q O6\#o&h4@+z,~
3.材料37℃ 恒温水 ,新鲜培养基,无菌吸管/离心管/培养瓶     ,液氮或干冰容
4.步骤:
4.1操作人员应戴防护面罩及手套,防止冷冻管可能爆裂之伤害 。
4.2自液氮或干冰容器中取出冷冻管  ,检查盖子是否旋紧 ,由于热胀冷缩过程 ,此时盖子易
松掉  。
4.3将新鲜培养基置于37°C水槽中回温,回温后喷以70%酒精并擦拭之,移入无菌操作台内    。
4.4取出冷冻管  ,立即放入37°C水槽中快速解冻 ,轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化以70%ethanol擦拭保存管外部 ,移入无菌操作台内 。
4.5取出0.9ml解冻之细胞悬浮液 ,缓缓加入有培养基之培养容器内(稀释比例1:10~1:15)混合均匀 ,放入CO2培养箱培养 。另取0.1ml解冻细胞悬浮液作存活测试。
4.6解冻后是否立即去除冷冻保护剂(例如DMSO或glycerol),依细胞种类而异  ,一般而言大都不需要立即去除冷冻保护剂。惟若要立即去除 ,则将解冻之细胞悬浮液加入含有5-10ml培养基之离心管内 ,离心1,000rpm,5分钟   ,移去上清液,加入新鲜培养基 ,混合均匀,放入CO2培养箱培养    。
4.7若不需立即去除冷冻保存剂  ,则在解冻培养后隔日更换培养基  。


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Shanghai Chuan Qiu Biotechnology Co.,Ltd.
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