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原代细胞如何取材,这些你都会吗 ?

一 、取材的基本要求
1.取材要注意新鲜和保鲜
2.应严格无菌
3.防止机械损伤
4.去除无用组织和避免干燥
5.应注意组织类型、分化程度   、年龄等
6.作好记录

二 、各类组织的取材技术
皮肤和粘膜的取材
内脏和实体瘤的取材
血液细胞的取材
骨髓 、羊水        、胸/腹水细胞取材
动物组织取材
人胚体组织取材
鸡(鸭)鸟类胚胎组织取材

皮肤和粘膜的取材
主要取自于手术过程中的皮片      ,方法似外科取断层皮片手术操作,但面积一般2~4c㎡。

内脏和实体瘤的取材
内脏除消化道外基本是无菌的    ,但取材时要明确和熟悉所需组织的类型和部位,实体瘤取材时要取肿瘤细胞丰富的区域 ,要避开破溃    、坏死液化部分   ,以防污染  ,尽量去除混杂的结缔组织 。

血液细胞的取材
血细胞  、淋巴细胞的取材,一般多抽取静脉外周血 ,或从淋巴组织中(如脾 、扁桃体   、胸腺、淋巴结等)分离细胞,取材时应注意抗凝。

骨髓、羊水 、胸/腹水细胞取材
严格无菌   ,注意抗凝    ,还要尽快分离培养,离心后 ,用无钙、镁PBS洗两次,再用培养液洗一次后即可培养     ,不宜低温存放 。

动物组织取材
鼠胚组织取材
首先用引颈或气管窒息致死法处死孕期合适的动物  ,然后将其整个浸泡在含有75%酒精的烧杯中,5min后(注意时间不能太长 ,以避免酒精从口或其他通道进入体内 ,影响组织活力) ,取出动物   ,在消毒过的木板上可用无菌的图钉或大头针固定四肢     ,切开皮肤 ,用无菌操作法解剖取胚或用无菌止血钳挟起皮肤  、用无菌眼科剪沿躯干中部环形剪开皮肤,用止血钳分别挟住两侧皮肤拉向头尾,把动物反包  ,暴露躯干,然后再固定 ,更换无菌解剖器材,采用无菌操作法解剖取出胚胎 。

幼鼠胚肾(或肺)取材
幼鼠采用上述方法处死消毒后,腹部朝上固定在木板上 ,先切开游离毛皮并拉开至两侧     :然后采用无菌法打开胸腔取肺 ,或背部朝上固定在木板上   ,先将背部毛皮切开游离并拉向两侧 ,然后采用无菌法从背部打开腹腔取肾  。

人胚体组织取材
取材方法与鼠类相同
鸡(鸭)鸟类胚胎组织取材步骤
(1)取孵化至适当胚龄(9~12天)的胚蛋 ,用照蛋灯在暗处灯检,若有丰富血管、胚体有运动的胚蛋   ,说明胚体发育良好  ,并用有色笔划出气室和胚体位置 。
(2)将胚蛋置于蛋架上 ,先用温水清洗蛋壳,再用75%酒精棉球擦干 ;
(3)经碘酒  、75%酒精消毒后    ,在无菌条件下采用无菌法用剪刀或中号镊子打开气室  ,沿气室边缘去除蛋壳;
(4)用眼科镊撕去壳膜   ,暴露出鸡胚    ;
(5)用弯头镊轻挑起胚头 ,取出胚胎  ,放入无菌平皿中 ,解剖取材    。

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