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支原体污染对细胞培养的危害 !

1.支原体污染的普遍性

支原体污染是细胞培养领域遇到的性问题,据文献报道 ,综合美国食品药品监督管理局(FDA)、美国模式菌种收集中心(ATCC)等机构收到的相关数据,世界各国细胞系支原体污染的平均比例为30-60%。该数据未统计中国大陆的数据,但可以确定   ,大陆地区的支原体污染比例与此相当   ,或更严重。

2.支原体污染的危害

根据已发表的支原体污染研究文献  ,支原体污染细胞后,几乎能影响每一个细胞参数   。

1)支原体污染可能导致细胞染色体的异常和损伤 ,改变细胞的代谢、生长、形状 、附着   。

2)支原体影响被污染细胞的基因表达 。相关研究表明,支原体污染的细胞系与对照组比较      ,有多达200个基因表达差异达2倍以上。

3)导致MTT等细胞毒性实验结果严重错误。支原体对MTT有额外还原作用 。

4)支原体污染能耗尽营养物  ,促进代谢积累,重度支原体污染导致pH改变 。

5)诱导或抑制细胞因子表达 ,并改变培养细胞的代谢 、增殖特征及形态。支原体污染可以直接影响L-arginine的代谢

6)支原体污染可以诱导树突状细胞成熟 ,这对于开展人体免疫细胞的肿瘤治疗的影响将是灾难性的   。

3.支原体污染的隐蔽性

支原体大小约0.1-0.6微米    ,体积比病毒稍大 ,轻度到中度的支原体污染不会明显改变细胞培养液的浑浊度和pH值,也不会导致细胞形态或生长速度的明显改变 ,所以科研人员很难及时发现体外培养的细胞已经被支原体污染,进而改变了基因表达谱    ,显示虚假的实验数据和实验结果。通常情况下    ,如果不排除支原体污染因素,很多实验结果往往缺乏说服力。2013年 ,Ding级期刊《Nature》明确要求,在涉及细胞培养的科研工作中 ,必须进行支原体检测,并排除其影响。

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