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细胞培养基常见成分及作用功能介绍

能量来源

每一个生长培养基都需要碳源,以供细胞新陈代谢  。碳源通常是葡萄糖 ,但也可以是其他糖类  ,如半乳糖、己糖   、果糖或其他碳源(如丙酮酸     ,谷氨酰胺) 。葡萄糖通常以终浓度为5.5 mM的含量添加    ,大约等于人体血液中的葡萄糖水平。然而 ,你可以购买葡萄糖浓度变化范围很广的培养基来满足你的具体需求 。你甚至可以购买不含葡萄糖的培养基 ,然后自己定制浓度   ,模拟高糖的糖尿病状况,或者研究低糖应激反应。


缓冲液

细胞需要一种特殊的pH值从7.2到7.4,否则它们无法最好地发挥细胞功能,以供生长和存活 。在二氧化碳含量较高的培养器中,二氧化碳与水发生反应 ,产生氢离子   ,使培养基酸化。为了中和二氧化碳产生的酸度 ,并在培养基中保持最佳pH值 ,大多数培养基都使用化学缓冲系统 。然而  ,一些缓冲方法会干扰细胞生长   。

哺乳动物细胞最常见的缓冲系统是碳酸氢钠,生物影响最小    。碳酸氢钠与氢离子反应生成二氧化碳,隔离它们以保持pH值 。然而,碳酸氢钠的一个缺点是,它在生理pH值上不是最佳的缓冲效果  。为了避免这个问题,研究人员经常使用替代品 ,如HEPES  ,增加某些培养基类型的缓冲能力 。

酚红

由于维持pH值对细胞培养至关重要 ,许多培养基配方包括一种名为酚红的pH指示剂  ,其在酸性条件下变黄(< 6.8),在基本条件下呈粉红色(> 8.2)    。虽然通常不是问题,但酚红可以模拟雌激素,因此,当培养表达雌激素受体的细胞类型时  ,通常被排除在外  。没有酚红的培养基可以用于比色测定,如MTT细胞增殖实验   ,苯酚的色谱可能会干扰光谱光度测量的读数 ,从而使结果混淆 。

血清

对许多培养体系来说,一个重要组成部分是血清,通常是胎牛血清  ,称为FBS  。血清来自于血液 ,是糖 、盐  、脂类、生长因子等许多成分的混合物   。由于它的生物来源 ,很难维持再生性,因为每一批血清都是独一无二的   。为了规避这一问题,一些实验室使用化学定义的血清替换物    ,一些实验室则购买一整批次的特定的血清,以确保一致的结果 。

代谢物 ,维生素和矿物质

DMEM的成分列表主要分为三大类:氨基酸 、维生素/辅因子和无机盐(包括钙和镁)  。许多这些成分在所有细胞培养基中都是常见的,而精确的组合和浓度已经对细胞生长进行了优化 。尽管如此,许多实验室还是选择用额外的非必需氨基酸补充他们的培养基   ,以防止细胞使用葡萄糖或谷氨酰胺来合成 。此外,一些公司生产无镁和钙的培养基用于特定的研究 ,选择时请仔细查看  。 

抗生素

很多实验室都在他们的细胞培养中加入抗生素,以防止不需要的细菌或真菌的生长,即使是无菌工作  。最常用的抗菌补充剂是青霉素和链霉素(pen / strep)的组合  ,在完整细胞培养基中 ,终浓度为青霉素50-100 IU/ mL和链霉素50 -100 g/ mL  。然而,一些实验室选择不使用抗生素 ,因为抗生素会对细胞产生不必要的影响,或者可以掩盖低水平的细菌污染       。根据需要    ,你可以决定是否在培养基中使用抗生素 。

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