血清是细胞培养中唯一外源添加的成分不确定的物质





，血清的质量对实验成败起着关键性作用


，但血清使用不当也可能会导致血清质量下降，造成细胞培养效果不理想
。今天来给大家聊聊血清使用中的一些疑惑，帮助大家理清头绪，实验开展顺顺利利




。

怎样确定血清使用浓度？

这个只能通过测试了



。原则上血清添加量不要太多，通常分为5%
、10%
、20%几档
。部分细胞原代提取时会使用20%血清，大部分细胞正常培养时会使用5%～10%的血清浓度
。至于某一株细胞适应什么样的血清浓度



，还需要根据细胞特性
、实验目的做测试和调校



。

血清使用前需要离心吗？

这个问题我理解为两种可能。

其一

，因为血清融解后有“絮状物”析出
。如果没有出现其他异常情况

，或者血清只是用于细胞培养
，那么完全没有必要离心去除。EBET易博知道血清析出的“絮状物”主要是血纤蛋白，其在血清中含量很高，而且高度不溶，在血清冻融过程中极易析出，但它也是完全无害的
，甚至能促进细胞生长

。另外


，它还增强了血清黏性


，为细胞提供了额外的机械缓冲
。在其析出过程中
，会粘附培养体系中其他成分
，离心去除，反而会损失营养成分。

其二
，实验要求纯净的培养体系


。培养的细胞需要进一步鉴定

，如免疫荧光
、流式、共聚焦拍照等
，细胞表面如果有黏性较强的血纤蛋白
，势必会影响效果
。那么，建议400g离心5min即可。如果需要进行精密实验，如分离外泌体等
，那么就需要至少100000g离心1.5h以上

血清灭活和不灭活有什么不一样？

在回答这个问题之前，EBET易博先要弄清楚灭活究竟灭的是什么成分的活性
。其实56℃


、30min的处理只能去除补体和部分其他蛋白的活性。补体是免疫系统的一部分







，在体内可通过多条途径被激活





，从而发挥调理吞噬、裂解细胞、介导炎症

、免疫调节和清除免疫复合物等多种作用
。血清灭活的说法最早是在细胞培养技术发展初期，大部分实验室还在使用小牛血清甚至成体动物血清，或者以前培养某些人源细胞时会添加人血清


。因为血清供体已与环境长期接触，体内免疫系统已经经历了一场又一场的战斗


，而保留了“丰厚的战利品”——抗体
、补体等
，这些成分在体内可以由免疫系统清除
，但在体外的细胞培养中



，可能会对部分细胞产生损伤

。巧在人们发现这些成分不耐受高温

，所以才有了热灭活处理。

细胞培养技术发展到今天
，EBET易博已经能把控原材料的质量。对于血清

，EBET易博会选择胎牛来源


。因为在体内有胎盘屏障的隔离，又尚未接触体外环境
，其自身免疫系统、免疫物质几乎为零
。这个时候


，如果不是对血清成分的极度苛刻

，再谈灭活就有些多余了。甚至因为热处理，导致血清内大量蛋白析出，同时粘附其他成分一起丢失

，对细胞培养而言就得不偿失了
。

怎样为您的细胞选择合适的血清
？

目前市面上的血清产品五花八门

，各种品牌宣称来自各个血源地，让人眼花缭乱

。可以确定的是，除了所谓的“水货”，它们当中绝大多数都是质量合格的产品
。但合格不一定好用

，或者说适用于某一种细胞。要确定一款血清的性能

，或者从众多血清来源中挑选一款，唯一的办法就是筛选验证。

血清的筛选验证主要包括

：形态验证

、增殖能力测试和克隆形成能力测试。EBET易博通过多次传代，分辨同细胞

、同代次

、不同血清样品培养的细胞形态间的细微差异

；或者同血清样品
、不同细胞、不同代次间



，细胞形态维持的情况
。EBET易博通过同一细胞多次传代
，每代接种相同细胞量
，间隔相同时间后计数得到单位时间倍增数，确定增殖性能
。又通过不同细胞在相同培养面积内接种相同的少量的细胞

，根据形成的单克隆数量
、大小，判断血清支持克隆形成的能力。

一款血清需要综合达到这几个性能的高水平表现




，才能称为好血清
。或者一款血清在培养某种细胞时
，这几个方面的表现都优秀

，才是最适用的
。