听说同学们的养的细胞常常因为各种原因一再受损或者死亡
，今天小秋拿出毕生功力，为大家讲述细胞培养中那些你可能忽略的小细节

细胞的营养来源

针对大多数肿瘤细胞
，营养配方一般为：90%合成培养基(DMEM、RPMI1640

、MEM等)和10%胎牛血清(FBS);为了防止污染
，可以加1%双抗!

常见问题解答：

Q：针对不同细胞，细胞培养基配方一样吗?如何获知呢?

A
：不同细胞的培养基是不同的


。在小秋家购买的细胞
，针对不同细胞株

，会有详细介绍

，包括生长的状态图


、培养基的类型等

。

Q：培养基为什么一般都是偏红色?

A
：因为培养基加了酚红来显示颜色


，指示pH范围为6-8


，颜色会由黄变为紫红




。这是为了EBET易博能更直观观察培养液的变化

，如变黄
，则代表偏酸




，偏碱性了就显示偏紫色
。一般来说，细胞吸收营养后

，变黄后就暗示EBET易博要换培养基啦!所以密切观察很重要哦!

Q：大多数细胞系可以在不止一种培养基中生长

，那可以替换吗?

A
：不建议更换指定的培养基
，因为当培养基改变时

，细胞的性质可能也会变化。

Q

：若是细胞生长缓慢


，是否可以增加血清比例?

A


：可以!

细胞的生长环境舒适无菌的环境是细胞健康成长的基础。如下图为培养细胞的器皿
，包括形状、规格、用途多样的培养瓶
、培养皿及培养板。最终住进37℃

，5%CO2的恒温培养箱。常见问题解答
：

Q：细胞培养板规格不一



，如何正确选用?
A：根据不同规格的细胞培养皿/板容量及用途
，如流式一般用 6 孔

，爬片一般用 24 孔，MTT 一般用 96 孔等。

Q

：细胞培养皿和培养瓶区别?
A：就细胞培养状态来说



，培养瓶和培养皿没有太大区别

，主要在于安全系数(培养瓶>培养皿)


、培养细胞数量(大培养瓶>培养皿)
。但是培养瓶成本也会相对较高



，因此无特殊要求，一般选择培养皿即可。

细胞的复苏与冻存
细胞复苏





：指将冻存的细胞解冻之后重新培养

，细胞恢复生长的过程
。复苏过程如下图所示：

常见问题解答：Q
：为什么细胞复苏后，很多难以贴壁?
A：忽略培养基的问题




，主要考虑细胞冻存时状态差或者复苏时动作太慢导致细胞死亡

。切记最重要的融化速度要快
，可不时摇动冷冻管
，使之尽快通过最易受损的温度段(-5～0℃)

。Q
：为什么细胞贴壁了

，却长不起来?
A




：此时需要考虑的是细胞密度问题


，一些细胞倾向于维持一定的密度







，若复苏的细胞生长缓慢，可将细胞转移到较小的培养瓶/皿中培养
。

细胞冻存

：将细胞放在低温环境(-70℃~-196℃)，细胞内的代谢降低，可最大限度的保存细胞活力


，以便长期储存
。

常见问题解答

：
Q




：目前细胞冻存液多采用的什么配方?

A：目前细胞冻存液的配方有很多种
，如培养基

：血清：DMSO=7:2:1或8：1
：1或5
：4
：1


，或直接用血清
：DMSO=9:1。 这里小秋推荐使用HAKATA无血清细胞冻存液
，无需程序降温
，细胞存活率和活力高达90%-98%，适用于干细胞冻存及无血清培养细胞
。

Q：若没有细胞冻存盒，EBET易博该怎么办?

A


：可先将冻存管放入4℃冰箱中10min，再移至-20℃冰箱30min，-80℃冰箱2h或过夜


，最后放入液氮罐内
。为了节约时间，还可直接在冻存盒外包裹一团棉花
，用棉花代替冻存盒缓慢降温的特点，将细胞转移至-80℃冰箱过夜
，再转移至液氮保存



。

Q

：细胞冻存时对细胞量有要求吗?

A：细胞复苏时会有一定的细胞死亡
，因此细胞的浓度应足够高，起始浓度106—107个/ml/管;

今天的内容就到这里了，细胞培养中的细节可马虎不得
，希望大家可以结合这些小技巧，将细胞养的更漂亮

！

按照国际惯例








，文末是时候放大招了
：

好细胞是实验的关键——EBET易博生物人源细胞均可提供STR鉴定，并且提供实验技术支持


，让你的实验全程无忧！

省时：实验所需

，一站购齐

省心：好品质

，好服务

更省钱:简直就是白送

好了各位同学们


，

为了能让你们毕业


，小秋也是费尽了心思，

但我也只能帮你们到这里了，

至于能不能毕业，就靠你们自己了...

你们懂我意思吧？