细胞的复苏与冻存
细胞复苏


：指将冻存的细胞解冻之后重新培养

，细胞恢复生长的过程。复苏过程如下图所示
：

常见问题解答
：Q：为什么细胞复苏后
，很多难以贴壁?
A：忽略培养基的问题



，主要考虑细胞冻存时状态差或者复苏时动作太慢导致细胞死亡。切记最重要的融化速度要快
，可不时摇动冷冻管



，使之尽快通过最易受损的温度段(-5～0℃)
。Q
：为什么细胞贴壁了
，却长不起来?
A：此时需要考虑的是细胞密度问题



，一些细胞倾向于维持一定的密度，若复苏的细胞生长缓慢，可将细胞转移到较小的培养瓶/皿中培养


。

细胞冻存




：将细胞放在低温环境(-70℃~-196℃)

，细胞内的代谢降低

，可最大限度的保存细胞活力
，以便长期储存
。

常见问题解答

：
Q


：目前细胞冻存液多采用的什么配方?

A：目前细胞冻存液的配方有很多种



，如培养基：血清：DMSO=7:2:1或8
：1：1或5：4
：1
，或直接用血清：DMSO=9:1。 这里推荐使用HAKATA无血清细胞冻存液
，无需程序降温
，细胞存活率和活力高达90%-98%，适用于干细胞冻存及无血清培养细胞。

Q：若没有细胞冻存盒


，EBET易博该怎么办?

A

：可先将冻存管放入4℃冰箱中10min

，再移至-20℃冰箱30min

，-80℃冰箱2h或过夜

，最后放入液氮罐内。为了节约时间
，还可直接在冻存盒外包裹一团棉花，用棉花代替冻存盒缓慢降温的特点



，将细胞转移至-80℃冰箱过夜
，再转移至液氮保存

。

Q：细胞冻存时对细胞量有要求吗?

A
：细胞复苏时会有一定的细胞死亡


，因此细胞的浓度应足够高





，起始浓度106—107个/ml/管;