货号

H159

种属

人

细胞来源

从ATCC/中科院/协和医院等地引进

生长特性

贴壁成骨细胞样

培养条件

培养基：90%DMEM/F-12+10%FBS（推荐HAKATA特级胎牛血清



，货号:HB-FBS-500）

温度

：34℃     气相
：95%空气
，5%二氧化碳

传代

1.用75%酒精喷洒整个培养瓶消毒

，将其平躺置于培养箱中进行1-3小时的缓冲，.然后置于无菌操作台
，打开瓶口，将其中的培养液去掉


，再往其中加入5-6mL新鲜培养基(以T25培养瓶为例)并置于细胞培养箱中培养，根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液以及传代，一般2到3天换一次液
；

2.待细胞长满瓶底面积80%-90%，需要对其进行传代
，传代比例为1:2到1:3

；

3传代步骤













：将0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液置于34°预热
，倒掉培养瓶中的培养基，往培养瓶中加入3-5 ml PBS，轻晃洗涤后弃去。往瓶中加1-2 ml预热好的胰酶，置于37°孵育消化（第一次消化需时常取出置于显微镜下观察，以显微镜下细胞触角回收变圆、轻拍瓶壁见细胞脱落为最佳消化时间，记录最佳消化时间
，以便于下次消化），消化好后加入3ml完全培养基终止消化。用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞


，使之完全脱落，然后收集细胞悬液
，1200rpm离心3min


，弃上清，加入完全培养基重悬细胞


，进行传代。

保存

冻存条件：80%完全培养基+10%FBS+10%DMSO

(备注：建议使用本公司的冷冻液（H-W-100）

，用4度保存的冷冻液直接重悬细胞
，不能预热后使用。)

保存条件
：液氮存储

供应限制

经供研究之用

常见问题及解决方案

1.培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以EBET易博会及时安排帮老师解决。

2.收到细胞后尽快更换新鲜培养基。

3.细胞漂浮
：培养瓶不开封


，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。1-2小时后观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以去掉，留8-10ml培养液培养观察，细胞生长至汇合度80%
，进行消化传代；如细胞还是不贴壁


，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察
，EBET易博的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决
。