货号

H165

种属

人

细胞来源

从ATCC/中科院/协和医院等地引进

生长特性

贴壁 上皮样

培养条件

培养基


：80%DMEM+20%FBS（推荐HAKATA优等胎牛血清

，货号:HN-FBS-500）

温度：37℃     气相：95%空气
，5%二氧化碳

传代

1.用75%酒精喷洒整个培养瓶消毒



，将其平躺置于培养箱中进行1-3小时的缓冲，.然后置于无菌操作台

，打开瓶口


，将其中的培养液去掉
，再往其中加入5-6mL新鲜培养基(以T25培养瓶为例)并置于细胞培养箱中培养，根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液以及传代


，一般2到3天换一次液
；

2.待细胞长满瓶底面积80%-90%






，需要对其进行传代

，传代比例为1:2到1:4
；

3传代步骤：将0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液置于37°预热，倒掉培养瓶中的培养基




，往培养瓶中加入3-5 ml PBS




，轻晃洗涤后弃去





。往瓶中加1-2 ml预热好的胰酶


，置于37°孵育消化（第一次消化需时常取出置于显微镜下观察，以显微镜下细胞触角回收变圆




、轻拍瓶壁见细胞脱落为最佳消化时间
，记录最佳消化时间，以便于下次消化）
，消化好后加入3ml完全培养基终止消化。用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞








，使之完全脱落，然后收集细胞悬液




，1200rpm离心3min，弃上清，加入完全培养基重悬细胞，进行传代




。

保存

冻存条件
：80%完全培养基+10%FBS+10%DMSO

(备注：建议使用本公司的冷冻液（H-W-100）
，用4度保存的冷冻液直接重悬细胞



，不能预热后使用



。)

保存条件
：液氮存储

供应限制

经供研究之用

常见问题及解决方案

1.培养瓶有破裂
，培养液有漏液
：细胞极大可能会污染

，所以EBET易博会及时安排帮老师解决。

2.收到细胞后尽快更换新鲜培养基
。

3.细胞漂浮
：培养瓶不开封
，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱
。1-2小时后观察

，如细胞大部分又贴回瓶底

，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以去掉

，留8-10ml培养液培养观察
，细胞生长至汇合度80%

，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养









，中间注意观察

，EBET易博的技术人员会一直跟踪指导

，直到问题解决
。