货号

H183

种属

人

细胞来源

从ATCC/中科院/协和医院等地引进

生长特性

轻度贴壁 上皮样

培养条件

培养基
：M199(含1.5g/L碳酸氢钠)+10%FBS（推荐HAKATA优等胎牛血清






，货号:HN-FBS-500）+3.3nM EGF+400nM氢化可的松+870nM牛胰岛素+20nM HEPES+3.87 µg/L H2SeO3

温度

：37℃     气相
：95%空气,5%CO2

传代

1.用75%酒精喷洒整个培养瓶消毒，将其平躺置于培养箱中进行1-3小时的缓冲
，.然后置于无菌操作台

，打开瓶口
，将其中的培养液去掉，再往其中加入5-6mL新鲜培养基(以T25培养瓶为例)并置于细胞培养箱中培养，根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液以及传代

，该细胞生长缓慢

，一般2到3天换一次液
；

2.待细胞长满瓶底面积80%-90%，需要对其进行传代
，传代比例为1:2到1:4


；

3传代步骤


：将0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液置于37°预热
，倒掉培养瓶中的培养基





，往培养瓶中加入3-5 ml PBS，轻晃洗涤后弃去。往瓶中加1-2 ml预热好的胰酶
，置于37°孵育消化（第一次消化需时常取出置于显微镜下观察
，以显微镜下细胞触角回收变圆



、轻拍瓶壁见细胞脱落为最佳消化时间

，记录最佳消化时间


，以便于下次消化）

，消化好后加入3ml完全培养基终止消化
。用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞


，使之完全脱落，然后收集细胞悬液
，1200rpm离心3min

，弃上清
，加入完全培养基重悬细胞
，进行传代。

保存

冻存条件
：80%完全培养基+10%FBS+10%DMSO

(备注
：建议使用本公司的冷冻液（H-W-100），用4度保存的冷冻液直接重悬细胞，不能预热后使用。)

保存条件

：液氮存储

供应限制

经供研究之用

常见问题及解决方案

1.培养瓶有破裂

，培养液有漏液


：细胞极大可能会污染


，所以EBET易博会及时安排帮老师解决





。

2.收到细胞后尽快更换新鲜培养基
。

3.细胞漂浮：培养瓶不开封

，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱




。1-2小时后观察，如细胞大部分又贴回瓶底



，表明细胞活力正常

，剩余漂浮的细胞可以去掉
，留8-10ml培养液培养观察，细胞生长至汇合度80%

，进行消化传代


；如细胞还是不贴壁

，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养

，中间注意观察

，EBET易博的技术人员会一直跟踪指导
，直到问题解决
。