人降钙素原定量分析酶联免疫检测试剂盒

本试剂盒仅供科研使用。用于体外定量检测人血清、血浆中的降钙素原浓度。使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分是否完整。如有产品包装破损或质量投拆，请在收到货一个月之内联系EBET易博。

降钙素原简介：

降钙素原（PCT）是由116个氨基酸组成的激素原，分子量大约为12.7KD。PCT由神经内分泌细胞（包括甲状腺，肺和胰腺组织的C细胞）表达，经酵切分解为(未成熟) 降钙素，羧基端肽和氨基端肽。健康人血中仅含有少量的PCT. 1.2. 细胞感染后PCT会明显升高。动物模型试验显示机体发生脓毒血症时，多组织均能表达PCT.3.脓毒血症患者体内的PCT只含有114个氨基酸，缺少氨基酸末端的Ala-Pro.4. PCT水平升高见于细胞性脓毒血症，尤其是重症脓毒血症和感染性休克.5.6.7.8.9.10.。PCT可作为脓毒血症的预后指标8.11.12.13，也是急性重症胰腺炎及其主要并发症的可靠指标.14.15。对于社区获得性呼吸道感染和空调诱导性肺炎患者，PCT可作为抗生素选择以及疗效的判断的指标。

检测原理:

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中降钙素原的浓度。降钙素原捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标本或参考品时，其中的降钙素原会与捕获抗体结合，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。当加入辣根过氧化物酶标记的抗人降钙素原抗体后，抗人降钙素原抗体与降钙素原接合，形成夹心的免疫复合物，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。最后加入显色剂，若样本中存在降钙素原将会形成免疫复合物，辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测，读其450nm处的OD值，降钙素原浓度与OD₄₅₀值之间呈正比，通过参考品绘制标准曲线，对照未知样本中OD值，即可算出标本中降钙素原浓度。

人降钙素原定量分析酶联免疫检测试剂盒组成:

标本收集:

1.标本的收集请按下列流程进行操作；

A.细胞上清标本离心去除悬浮物后即可；

B.血清标本应是自然凝固后，取上清，避免在冰箱中凝固血液；

C.血浆标本，推荐用EDTA的方法收集若待测样本不能及时检测，

D.标本收集后请分装，冻存于－20℃，避免反复冻融。

2.血清标本不应添加任何防腐剂或抗凝剂；

3.标本应清澈透明，检测前样本中如有悬浮物应通过离心去除。

4.请勿使用溶血，高血脂或污染的标本检测，否则结果将不准确。

注意事项:

1.试剂盒请保存在2～8℃。

2.浓缩洗涤液因在低温下可能有结晶，请水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。

3.标准品复溶加样后，剩余部份请丢弃。

4.底物请勿接触氧化剂和金属。

5.加样时，请及时更换枪头，避免交叉污染。

6.严禁混用不同批号的试剂盒组份。

7.充分混匀对保证反应结果的准性很重要，在加液后请轻轻叩击边缘以保证混匀。

8.室温反应，请严格控制在25～28℃。

9.洗涤过程是至关重要的，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。

10.试验中标准品和样本检测时建议作双复孔。

11.加样过程中避免气泡的产生。

样本的稀释:

血清或血浆样本建议从2倍开始稀释

检测前准备工作: 

1.试剂盒自冰箱中取出后应置室温（25～28℃）平衡20分钟；每次检测后剩余试剂请及时于2～8℃保存。

2.将浓缩洗涤液用双蒸水或去离子水稀释(1份加19份水)。

3. 将检测抗体用检测抗体稀释液按标识提前10分钟配制成工作浓度；

4.如有5X准品稀释液，请按所需量用双蒸水或去离子水稀释(1份加4水)。

5.标准品: 按标签复溶体积加入标准品稀释液复溶使降钙素原终浓度达到4000ng/ml，室温反应，请严格控制在25～28℃，静置10~15分钟后轻轻混悬（建议抽吸几次）待彻底溶解，用标准品稀释液倍比梯度稀释后依次加入检测孔中。（标准曲线取七个点，最高浓度为4000ng/ml,标准品稀释液直接加入作为0浓度.）下图为标准品稀释示意图。

洗涤方法:

自动洗板机或人工洗板：每孔洗涤液为300ul，注入与吸出间隔15-30秒。洗板5次。最后一次洗板完成后将板倒扣着在厚吸水纸上用力拍干。

实验过程需自备的材料：

1.不同规格的加样枪及相应的枪头；   

2.酶标仪；

3.自动洗板机；                     

4.去离子水或双蒸水；

操作步骤:

1.通过计算并确定一次性实验所需的板条数，取出所需板条放置在框架内，暂时用不到板条请放回铝箔袋密封，保存于4℃。

2.建议设置本底较正孔，即空白孔,设置方法为该孔只加TMB显色液和中止液。每次实验均需做标准品对照并画出标准曲线。

3.分别将稀释好的标本或不同浓度标准品(100ul/孔)加入相应孔中，用封板胶纸封住反应孔，室温（25～28℃）孵育120分钟。    

4.洗板5次，且最后一次置厚吸水纸上拍干。

5.每孔加入HRP抗体结合物工作液(100ul/孔)。用封板胶纸封住反应孔，室温（25～28℃）孵育60分钟。    

6.洗板5次，且最后一次置厚吸水纸上拍干。

7. 加入显色剂TMB100ul/孔，避光室温（25～28℃）孵育20分钟。

8. 加入终止液50ul/孔,混匀后即刻测量OD₄₅₀值。

结果判断:

1.复孔的值在20%的差异范围内结果才有效，复孔的值平均后可作为测量值。

2.每个标准品或标本的OD值应减去本底校正孔的OD值。

3.手工绘制标准曲线。以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，以平滑线连接各标准品的坐标点。通过标本的OD值可在标准曲线上查出其浓度。

4.若标本OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。

典型数值和参考曲线

人降钙素原参考标准曲线

注意：本图仅供参考，应以同次试验标准品所绘标准曲线计算标本含量。

灵敏度，特异性和重复性:

1.灵敏度：多次重复结果表明，最小检出量为48pg/ml。

2.特异性：与人的katacalcin，Calcitonin , alpha-CGRP,beta-CGRP等没有交叉反应。

3.重复性：板内，板间变异系数均<10%.

参考文献:

1、Lee JY, Hwang SJ, Shim JW, Jung HL, Park MS, Woo HY and Shim JY:Clinical Significance of Serum Procalcitonin on Patients with Community- acquired Lobar Pneumonia. Korean J Lab Med. 2010, 30(4): 406-13

2、Maruna P, Nedělníková and Gürlich R:Physiology and Genetics of Procalcitonin. Physiol. Res. 2000, 49: 57-61

3、Schultz MJ and Determann RM:PCT and sTREM-1: The markers of infection in critically ill patients?Med Sci Monit. 2008, 14(12): 241-247

4、Pecile P, Miorin E, Romanello C, Falleti E, Valent F, Giacommuzzi F and Tenore A: Procalcitonin : A Marker of Severity of Acute Pyelonephritis Among Children. Pediatrics. 2004, 114(2): 249-254

5、Smolkin V, Koren A, Raz R, Colodner R, Sakran W and Halevy R:Procalcitonin as a marker of acute pyelonephritis in infants and children. Pediatr Nephrol. 2002, 17: 409-41